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大鼠TSH ELISA KiT

2010年01月20日 09:17:03来源:上海源叶生物科技有限公司作者:上海源叶生物科技有限公司

产品编号:EIA05394
使用前*阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理,能测量大鼠促甲状腺素(TSH),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

工作原理
促甲状腺激素(thyrotropin,thyroid stimulating hormone,TSH)是腺垂体分泌的促进甲状腺的生长和机能的激素。人类的TSH为一种糖蛋白,含211个氨基酸,糖类约占整个分子的15%。整个分子由两条肽链——α链和β链组成。TSH全面促进甲状腺的机能,稍早出现的是促进甲状腺激素的释放,稍晚出的为促进T4、T3的合成,包括加强碘泵活性,增强过氧化物酶活性,促进甲状腺球蛋白合成及*碘化等各个环节。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经*(biotin)标记。样品和*标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

每套试剂盒中内容(96T)

材料 数量
标准品 96T(2vial)
预包被抗体的96孔板 96T(8×12)
*标记抗体 96T (1:100)
ABC(亲和素-过氧化物酶复合物) 96T (1:100)
样品稀释液 96T×2
抗体稀释液 96T×1
ABC稀释液 96T×1
TMB显色液A 96T×1
TMB显色液B 96T×1
TMB终止液 96T×1
ELISA洗涤液 96T×1(1:25)

需要而未提供的试剂和器材
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 自动洗板机。
4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5. 蒸馏水,容量瓶等
6. 干净的试管和Eppendof管。

注意事项
1. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
2. 配制各种试剂时,切记混匀!
3. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
4. 建议所有标准品、样本都做双份检测。
5. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活!
6. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。

洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存
样品如不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液,室温凝固2小时或4℃过夜,离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。

试剂的准备和保存
A. 标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液,*溶解后,混匀做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。

B.*标记抗体工作液:在使用前2小时内准备。
1. 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实际配制时应多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul*标记抗体加抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C.亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。
1. 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实配时应多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备:在使用之前30分钟,按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

操作程序
1. 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2. 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3. 酶标板加上盖,37℃反应90分钟。
4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5. 将准备好的*抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。
7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。
9. 按每孔0.09ml依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应zui长不要超过30分钟)。
10. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。

操作程序总结:
准备试剂,样品和标准品

加入准备好的样品和标准品,37℃反应90分钟

洗板2次,加入*化抗体工作液,37℃反应60分钟

洗板3次,加入ABC工作液,37℃反应30分钟

洗板5次,加入TMB显色液,37℃反应

加入TMB终止液

30分钟之内读OD值

计算标本待测因子含量


检测范围:0.312 mIU/L - 20 mIU/L。
敏感性: <0.078 mIU/L
特异性: 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存: -20℃ [短期内(如两周)可4℃]
有效期: 12个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析液体标本(通用型)。


REFERENCES
1. Geissler, E.et al.(1988) Cell 55:185.
2. Chabot, B.et al. (1988) Nature 335:88.
3. Besmer, P.et al.(1986) Nature 320:415.
4. Huang, E.et al.(1990) Cell 63:225.
5. Zsebo, K.M.et al. (1990) Cell 63:213.
6. Zsebo, K.M.et al. (1990) Cell 63:195.
7. Flanagan, J.G. and P. Leder (1990) Cell 63:185.
8. Copeland, N.G.et al. (1990) Cell 63:175.
9. Williams, D.E. et al.(1990) Cell 63:167.
10. Witte, O.N. (1990) Cell 63:5.
 

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